合成生物學基礎實驗原理與技術:大腸桿菌篇(牛福星) 版權信息
- ISBN:9787122458339
- 條形碼:9787122458339 ; 978-7-122-45833-9
- 裝幀:平裝
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合成生物學基礎實驗原理與技術:大腸桿菌篇(牛福星) 本書特色
合成生物學以其“造物致知、造物致用”的理念快速發展,已經廣泛應用于生物醫藥、新材料、農業、食品、環境保護等領域。目前世界上有超過60%的化學品可以被用于生物合成,掌握合成生物學技術精華是目前生物領域學者的必修課。本書從實驗設計上對于初學者迅速入門具有巨大助益,同時有助于提高開設本門相關課程實驗員及任課老師上課效率。
合成生物學基礎實驗原理與技術:大腸桿菌篇(牛福星) 內容簡介
合成生物學是生命科學發展過程中產生的一門綜合性學科。其基本實驗技術主要涉及基因工程、代謝調控、基因編輯等。本書就合成生物學研究常用實驗對象——大腸桿菌進行系統性實驗設計。按照合成生物學基礎實驗流程:菌株的感受態制備、瓊脂糖凝膠的制備、核酸提取及驗證、工具酶使用、載體構建、陽性轉化子篩選、蛋白質表達及鑒定以及基因編輯實驗流程進行編寫。同時設置了相關的思考題以幫助讀者進一步了解該實驗。
書中對每一個實驗的原理進行了清晰的描述,書中所展示的實驗技術不同于傳統的分子生物學技術,而是對數個博士實驗常用技術改進并總結,包含更加便捷高效的實驗技巧。本教材適合作為高等學校合成生物學、生物工程等專業的實驗教材,也是初入合成生物學領域科研人員、教學工作人員不可多得的參考書。
合成生物學基礎實驗原理與技術:大腸桿菌篇(牛福星) 目錄
**章 感受態細胞的快速制備及轉化 001**節 感受態細胞的化學法快速制備 003一、實驗目的 003二、實驗原理 003三、實驗材料、試劑與設備 004四、實驗流程 004五、注意事項 005六、思考題 005第二節 利用熱激法制備的感受態細胞進行轉化 006一、實驗目的 006二、實驗原理 006三、實驗材料、試劑與設備 007四、實驗流程 007五、注意事項 007**章 感受態細胞的快速制備及轉化 001**節 感受態細胞的化學法快速制備 003一、實驗目的 003二、實驗原理 003三、實驗材料、試劑與設備 004四、實驗流程 004五、注意事項 005六、思考題 005第二節 利用熱激法制備的感受態細胞進行轉化 006一、實驗目的 006二、實驗原理 006三、實驗材料、試劑與設備 007四、實驗流程 007五、注意事項 007六、思考題 008第三節 感受態細胞的電轉化法快速制備 009一、實驗目的 009二、實驗原理 009三、實驗材料、試劑與設備 009四、實驗流程 010五、注意事項 010六、思考題 011第四節 利用電轉化法制備的感受態細胞進行轉化 012一、實驗目的 012二、實驗原理 012三、實驗材料、試劑與設備 013四、實驗流程 013五、注意事項 013六、思考題 014
第二章 PCR 擴增及瓊脂糖凝膠核酸電泳技術 015**節 常規PCR 技術 017一、實驗目的 017二、實驗原理 017三、實驗材料、試劑與設備 017四、實驗流程 019五、注意事項 019六、思考題 020第二節 重疊延伸PCR 技術 021一、實驗目的 021二、實驗原理 021三、實驗材料、試劑與設備 021四、實驗流程 023五、注意事項 023六、思考題 024第三節 定點突變PCR 技術 025一、實驗目的 025二、實驗原理 025三、實驗材料、試劑與設備 025四、實驗流程 026五、注意事項 027六、思考題 028第四節 瓊脂糖凝膠核酸電泳技術 029一、實驗目的 029二、實驗原理 029三、實驗材料、試劑與設備 029四、實驗流程 030五、注意事項 031六、思考題 032
第三章 DNA 提取 033**節 大腸桿菌基因組的提取(機械破胞 柱法回收) 035一、實驗目的 035二、實驗原理 035三、實驗材料、試劑與設備 036四、實驗流程 036五、注意事項 037六、思考題 037第二節 質粒提。▔A裂解 柱回收法) 038一、實驗目的 038二、實驗原理 038三、實驗材料、試劑與設備 039四、實驗流程 039五、注意事項 040六、思考題 041第三節 PCR 產物回收(乙醇沉淀法) 042一、實驗目的 042二、實驗原理 042三、實驗材料、試劑與設備 042四、實驗流程 043五、注意事項 043六、思考題 043第四節 PCR 產物/ 酶切產物純化(柱提法) 044一、實驗目的 044二、實驗原理 044三、實驗材料、試劑與設備 044四、實驗流程 045五、注意事項 046六、思考題 046
第四章 工具酶的使用以及載體構建 047**節 限制性核酸酶(DpnⅠ)的使用 050一、實驗目的 050二、實驗原理 050三、實驗材料、試劑與設備 050四、實驗流程 051五、注意事項 051六、思考題 052第二節 限制性核酸內切酶的使用 053一、實驗目的 053二、實驗原理 053三、實驗材料、試劑與設備 053四、實驗流程 054五、注意事項 055六、思考題 055第三節 連接酶的使用 056一、實驗目的 056二、實驗原理 056三、實驗材料、試劑與設備 056四、實驗流程 057五、注意事項 057六、思考題 059第四節 T 載體構建 060一、實驗目的 060二、實驗原理 060三、實驗材料、試劑與設備 061四、實驗流程 061五、注意事項 062六、思考題 062
第五章 陽性轉化子的篩選與鑒定 063**節 菌落PCR 鑒定 065一、實驗目的 065二、實驗原理 065三、實驗材料、試劑與設備 065四、實驗流程 066五、注意事項 067六、思考題 067第二節 基于藍白斑篩選的載體構建 068一、實驗目的 068二、實驗原理 068三、實驗材料、試劑與設備 068四、實驗流程 069五、注意事項 070六、思考題 070第三節 基于熒光蛋白報告基因的載體構建和鑒定 071一、實驗目的 071二、實驗原理 071三、實驗材料、試劑與設備 071四、實驗流程 072五、注意事項 072六、思考題 073第四節 選取載體的重鑒定 074一、實驗目的 074二、實驗原理 074三、實驗材料、試劑與設備 074四、實驗流程 075五、注意事項 076六、思考題 076
第六章 蛋白質表達純化及鑒定 077**節 蛋白質表達 079一、實驗目的 079二、實驗原理 079三、實驗材料、試劑與設備 079四、實驗流程 080五、注意事項 080六、思考題 081第二節 細胞收集與破碎 082一、實驗目的 082二、實驗原理 082三、實驗材料、試劑與設備 082四、實驗流程 083五、注意事項 084六、思考題 084第三節 蛋白質純化 085一、實驗目的 085二、實驗原理 085三、實驗材料、試劑與設備 085四、實驗流程 086五、注意事項 087六、思考題 088第四節 SDS-PAGE 電泳 089一、實驗目的 089二、實驗原理 089三、實驗材料、試劑與設備 089四、實驗流程 091五、注意事項 092六、思考題 093
第七章 CRISPR 技術應用 095**節 CRISPR 基因敲除 097一、實驗目的 097二、實驗原理 097三、實驗材料、試劑與設備 097四、實驗流程 100五、注意事項 102六、思考題 103第二節 CRISPR 基因敲除驗證及質粒去除 104一、實驗目的 104二、實驗原理 104三、實驗材料、試劑與設備 104四、實驗流程 105五、注意事項 106六、思考題 107第三節 CRISPR 基因抑制 108一、實驗目的 108二、實驗原理 108三、實驗材料、試劑與設備 108四、實驗流程 109五、注意事項 110六、思考題 110第四節 CRISPR 基因激活 111一、實驗目的 111二、實驗原理 111三、實驗材料、試劑與設備 112四、實驗流程 112五、注意事項 113六、思考題 114
附錄一 常用培養基配方 115
附錄二 常用限制性內切酶 119
附錄三 思考題參考答案 123
參考文獻 139
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合成生物學基礎實驗原理與技術:大腸桿菌篇(牛福星) 作者簡介
牛福星,副教授,2015.9-2018.7博士畢業于中山大學,2018.8-2021.8于中山大學繼續從事博士后科研工作,主要從事合成生物學方向研究。目前主持在研國家自然科學基金地區項目1項(33萬),中央引導地方科技發展專項1項(50萬),廣西科技計劃項目1項(10萬),廣西科技大學3331人才項目1項(100萬)。近五年主持完成省部級資金來源項目3項,參與國家重點研發項目1項(341萬)。目前擔任廣西科技大學生化學院生工系主任、廣西科技評審專家,廣西科協智庫專家;廣西微生物學會理事等職務;同時為Journal of Agricultural and Food Chemistry、Frontiersin Microbiology、Scientific Reports、Frontiers in Bioengineering and Biotechnology等國際期刊審稿工作。目前主講本科基因工程實驗課程,發酵工程、生物分離工程專業必修課程,以及研究生代謝控制發酵、微生物工藝實驗課程。